电转液中SDS增加蛋白的水溶性，促进蛋白在电转液中泳动若不加SDS，蛋白会沉淀在胶上，但SDS过多会影响蛋白与膜的吸附甲醇能使SDS与蛋白分离，甲醇浓度越高SDS与蛋白分离越快，但高浓度的甲醇对蛋白会有固定作用，不利于蛋白从胶里跑出来一般来说甲醇的浓度为20%，但PVDF膜截留marker上交联的。

没啥问题VDF膜一定要在纯甲醇里浸润的不然蛋白结合不上去在100%甲醇里短暂浸润，其目的是为了活化PVDF膜上面的正电基团，使它更容易跟带负电的蛋白质结合小分子及大分子量的蛋白转移时，多加或不加甲醇也是这个目的因为小分子不容易和膜结合而大分子更容易转膜的过程，是一个恒定电场下。

通常用045μm和02μm两种规格的PVDF膜大于20kD的蛋白可用045μm的膜，小于20kD的蛋白就要用02μm的膜了，如用045μm的膜就会发生“Blowthrough”的现象PVDF膜灵敏度分辨率和蛋白亲和力比常规的膜要高，非常适合于低分子量蛋白的检测2PVDF膜在使用之前必需用纯甲醇浸泡饱和15秒。

首先，关于转膜缓冲液，它通常是某种类型的盐溶液，如Tris甘氨酸或TrisHCl缓冲液等，这些溶液的pH值一般都需要精确控制例如，在蛋白质印迹法中，常用的转膜缓冲液一般包含25mM Tris碱，192mM甘氨酸，以及20%的甲醇这样的配方有助于在电场作用下，将蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶中有效转移到PVDF膜上其次。