1、一般蛋白变性沉淀方法有氯仿甲醇沉淀， TCA沉淀非变性沉淀方法是在保持低温下，加入硫酸铵，PEG，或者有机溶剂如丙酮，乙醇，甲醇，非变性沉淀中硫酸铵和PEG可能会是蛋白沉淀不完全，而有机溶剂在低温下也会使部分蛋白质变性，所以要根据实验目的慎重选择分离蛋白质常用的方法有蛋白沉淀，超滤，柱；原理是与水互溶的有机溶剂如甲醇乙醇能使一些蛋白质在水中的溶解度显著降低而且在一定温度pH值和离子强度下，引起蛋白质沉淀的有机溶剂的浓度不同，因此，控制有机溶剂的浓度可以分离纯化蛋白质；甲醇沉淀蛋白优点1分辨能力比盐析法高，即蛋白质或其它溶剂只在一个比较窄的有机溶剂浓度下沉淀2沉淀不用脱盐，过滤较为容易乙腈优点又名甲基氰，无色液体，极易挥发，有类似于醚的特殊气味，有优良的溶剂性能，能溶解多种有机无机和气体物质缺点有一定毒性，与水和醇无限互溶乙；无机盐沉淀蛋白是可逆的即将样品稀释后蛋白仍具有生理活性而有机溶剂与 酸类沉淀的蛋白是不可逆的， 用甲醇沉淀蛋白的优点是上清液清凉， 沉淀为絮 状易于分离，乙睛与之相反， 产生细的蛋白沉淀在做血浆样品时，用甲醇或乙腈沉淀蛋白，一般用血浆与沉淀剂的比例为乙，有实验显示以血清，甲醇最低13一般15以上；“蛋白质的变性”是指蛋白质分子中的次级键被破坏主要是氢键和离子键甲醇乙醇丙酮等有机溶剂可以提供自己的羟基或羰基上的氢或氧去形成氢键，从而破坏了蛋白质中原有的氢键，使蛋白质变性而引起蛋白质沉淀的原因一方面是由于甲醇乙醇丙酮等有机溶剂加入水中使溶剂介电常数降低，增加了相反。

2、“蛋白质的变性”是指蛋白质分子中的次级键被破坏主要是氢键和离子键甲醇乙醇丙酮等有机溶剂可以提供自己的羟基或羰基上的氢或氧去形成氢键，从而破坏了蛋白质中原有的氢键，使蛋白质变性而引起蛋白质沉淀的原因一方面是由于甲醇乙醇丙酮等有机溶剂加入水中使溶剂介电常数降低，增加了相反电荷的吸引力，另；甲醇和高氯酸沉淀蛋白的区别 盐析法 多用于各种蛋白质和酶的分离纯化在蛋白质溶液中加入大量的中性盐以破坏蛋白质的胶体稳定性而使其析出，这种方法称为盐析常用的中性盐有硫酸铵硫酸钠氯化钠等各种蛋白质盐析时所需的盐浓度及pH不同，故可用于对混和蛋白质组分的分离例如用半饱和的；因此在电场中可以移动6凡能与水以任意比例混合的有机溶剂，在相互接触的两相固定相与流动相之间的分布不同而进行分离2氯化钠超速离心5，大分子蛋白质不能进入孔内而径直流出甲醇，均可引起蛋白质沉淀常用的中性盐有，因此不同大小的蛋白质得以分离，小分子蛋白质进入孔内，因而在柱中滞留；盐析法可以使蛋白质沉淀盐析法的原理 蛋白质在水溶液中的溶解度取决于蛋白质分子表面离子周围的水分子数目，亦即主要是由蛋白质分子外周亲水基团与水形成水化膜的程度以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的蛋白质溶液中加入中性盐后，由于中性盐与水分子的亲和力大于蛋白质，致使蛋白质分子周围的水化层减弱。

3、甲醇乙醇丙酮等有机溶剂可以提供自己的羟基或羰基上的氢或氧去形成氢键，从而破坏了蛋白质中原有的氢键，使蛋白质变性而引起蛋白质沉淀的原因一方面是由于甲醇乙醇丙酮等有机溶剂加入水中使溶剂介电常数降低，增加了相反电荷的吸引力，另一方面是因为这些有机溶剂是强亲水试剂，争夺蛋白质分子表面；β盐析固定离子强度，改变pH及温度2等电点沉淀法 蛋白质等电点沉淀法是基于不同蛋白质离子具有不同等电点这一特性，依次改变溶液pH值的办法，将杂蛋白沉淀除去，最后获得目标产物3有机溶剂沉淀法 许多能与水互溶的有机溶剂如乙醇丙酮甲醇和乙腈，常用于低盐浓度下沉淀蛋白质4非；有机溶剂沉淀蛋白质的原理是加入有机溶剂使水溶液的介电常数降低，因而增加了两个相反电荷基团之间的吸引力，促进了蛋白质分子的聚集和沉淀一有机溶剂沉淀法 利用与水互溶的有机溶剂如甲醇乙醇丙酮等能使蛋白质在水中的溶解度显著降低而沉淀的方法，称为有机溶剂沉淀二影响因素 1有。

4、若不加SDS，蛋白会沉淀在胶上，但SDS过多会影响蛋白与膜的吸附甲醇能使SDS与蛋白分离，甲醇浓度越高SDS与蛋白分离越快，但高浓度的甲醇对蛋白会有固定作用，不利于蛋白从胶里跑出来一般来说甲醇的浓度为20%，但PVDF膜截留marker上交联的小分子颜料的能力很差，可考虑提升甲醇的浓度至25%它对；沉淀蛋白，离心分离，再过柱纯化，进一步浓缩；沉淀不会是百分之百的，而且实验操作过程中总会有损失；乙腈和甲醇是常用的溶剂，在生物样品沉淀中常被用到乙腈和甲醇有一些独特的特性，使它们在生物样品沉淀中更加有效首先，乙腈和甲醇都具有很好的溶解能力，可以溶解大多数蛋白质和核酸因此，在沉淀生物样品时，乙腈和甲醇可以有效地溶解蛋白质和核酸，使它们更容易被沉淀其次，乙腈和甲醇具有较低的；2等电点沉淀法蛋白质在静电状态时颗粒之间的静电斥力最小，因而溶解度也最小，各种蛋白质的等电点有差别，可利用调节溶液的pH达到某一蛋白质的等电点使之沉淀，但此法很少单独使用，可与盐析法结合用3低温有机溶剂沉淀法用与水可混溶的有机溶剂，甲醇，乙醇或丙酮，可使多数蛋白质溶解度。

5、甲醇沉淀血浆超过3000×g时离心力可以沉淀干净根据查询相关公开信息显示，血浆中的红细胞血小板等因子比重大，而抗体和血浆内源性蛋白的比重相对较小，在相对离心力的作用下，红细胞和血小板会下沉，而抗体和血浆内源性蛋白则会保持在悬浮液中。