1、与其他酵母一样，在无性生长期主要以单倍体形式存在，当环境营养限制时，常诱导2个生理类型不同的接合型单倍体细胞交配，融合成双倍体毕赤酵母研究意义巴斯德毕赤酵母的一个生物学特点是，甲醇代谢所需的醇氧化酶被分选到过氧化物酶体中，形成区域化以葡萄糖作碳源时，菌体中只有1个或很少几。

2、外源基因在甲醇以外的碳源中处于非表达状态，而在培养液中加入甲醇后，外源基因即被诱导表达巴斯德毕赤酵母中存在着一种称为微体的细胞器，其中大量合成过氧化物酶，因此也称为过氧化物酶体合成的蛋白质贮存于微体中，可免受蛋白酶的降解，且不对细胞产生毒害。

3、感受态诱导基因如AOX1基因是响应甲醇的诱导子，当添加甲醇时，会启动该基因的表达通过适当控制聚甲醇浓度和培养时间，可以实现目标蛋白在感受态下的高水平表达毕赤酵母gs115感受态制备的原理主要是通过构建表达载体转化。

4、一旦在培养液中添加甲醇，就会触发外源基因的诱导表达巴斯德毕赤酵母体内的一种独特细胞器微体，是其的一大特点微体内富含过氧化物酶，因此也被称为过氧化物酶体在微体中合成的蛋白质得以储存，免受蛋白酶的降解，同时不对细胞产生有害影响，这为其作为外源基因表达的平台提供了有利条件。

5、Pichiapastoris酵母菌体内无天然质粒，所以表达载体需与宿主染色体发生同源重组，将外源基因表达框架整合于染色体中以实现外源基因的表达包括启动子外源基因克隆位点终止序列筛选标记等表达载体都是穿梭质粒，先在大肠杆菌复制扩增，然后被导入宿主酵母细胞为使产物分泌胞外，表达载体还需带有信号肽。

6、SacI线性化后，通过LICl方法将构建好的重组载体转到毕赤酵母，MD板G418板筛选到菌落后，怎样鉴定毕赤酵母是Mut+还是Muts，若是 Mut+如何诱导，请大家指教，不胜感激回复用点MMMD平板点方法准备几块MMMD，平板用maker笔划小格子，标号，两种平板点标号要一一对应准备无菌牙签，点取G418板上。

7、用甲醇诱导毕赤酵母表达目的蛋白前，为什么用甘油扩菌 酵母表达系统作为一种后起的外源蛋白表达系统，由于兼具原核以及真核表达系统的优点，正在基因工程领域中得到日益广泛的应用，应用此系统可高水平表达蛋白，且具有翻译后修饰功能，故被认可为一种表达大规模蛋白的强有力的工具常用的酵母表达系统一。

8、外源基因在甲醇以外的碳源中处于非表达状态，而在培养液中加入甲醇后，外源基因即被诱导表达巴斯德毕赤酵母中存在着一种称为微体的细胞器，其中大量合成过氧化物酶，因此也称为过氧化物酶体合成的蛋白质贮存于微体中，可免受蛋白酶的降解，且不对细胞产生毒害12载体巴斯德毕赤酵母的载体是整合型载体常见的表达。

9、PH升高到多少有染菌的可能，尝试现用低PH28左右处理一下23H，然后调回PH50，再试一试你摇床速率是多少瓶口用什么封的，建议还是用纱布，用那种带孔的塑料膜我感觉不太靠谱，灭菌的时候沾上点水就不太透气了。

10、为了克服这些局限，吉林师范大学生命科学学院和吉林大学基础医学院的研究者们创新性地利用毕赤酵母Pichia pastoris表达系统，这个高效且经济的真核表达平台毕赤酵母的特性在于其甲醇诱导下的AOX1基因表达，可诱导外源蛋白编码，如BMP4融合蛋白的生成通过将BMP4基因与IgG Fc基因融合，研究者成功实现了。

11、甲醇营养型毕赤酵母优点1具有醇氧化酶AOX1基因启动子，这是目前最强，调控机理最严格的启动子之一2表达效率高，其表达的外源蛋白可占总表达蛋白的90%以上，有利于目的蛋白的分离纯化3在简单合成培养基中可实现高密度培养4表达质粒能在基因组的特定位点以单拷贝或多拷贝的形式稳定整合。

12、使用诱导型启动子起始外源基因表达，如毕赤酵母用AOX醇氧化酶启动子，利用甲醇诱导起始外源蛋白的表达，可自由控制添加甲醇的时期和浓度或者大肠杆菌里用Lac自动子，利用乳糖或IPTG诱导外源基因表达，可自由控制诱导物添加的时期和添加量。

13、不太可能，Invitrogen的商业化毕赤酵母表达系统属于甲醇酵母表达系统，用的是毕赤酵母独有的AOX1启动子，由甲醇诱导酿酒酵母用的启动子大多用的是GAPDH或Gal启动子等，由葡萄糖和半乳糖诱导虽然两种菌株有很多基因具有较高的同源性，但不能通用建议使用毕赤酵母表达系统，酿酒酵母表达量低，诱导不。

14、毕赤酵母诱导后SDS电泳蛋白在沉淀中是为什么 1你应该是没有明白什么是包涵体，简单的说就是翻译的蛋白没有正确折叠而聚集在一起形成的，主要的是疏水作用实际上就是很多个蛋白分子，这些蛋白并不是交联在一起的，用高浓度的尿素和盐酸胍可以使他们变性，解聚2用沉淀跑电泳可以确定目的蛋白是否在包涵体。

15、1987年，Cregg等人首次报道了用甲醇营养型酵母表达乙型肝炎表面抗原HbsAg随后Philip Petroleum公司与Salk Institute BiotechnologyIndustrial AssociatesSIBIA就开始了毕赤酵母表达系统的合作开发SIBIA的研究人员分离了AOX基因的启动子和宿主菌株，构建了载体，并开发出了相应的毕赤酵母基因操作技术，结合。

16、1细胞增殖繁衍2分批流加的过渡阶段甘油或葡萄糖3诱导表达阶段甲醇各阶段碳源都为限制性基质，其补加速率的动力学模型是高效表达的基础。