毕赤酵母是甲醇营养型酵母中的一类能够利用甲醇作为唯一碳源和能源的酵母菌毕赤酵母生理特性与其他酵母一样，在无性生长期主要以单倍体形式存在，当环境营养限制时，常诱导2个生理类型不同的接合型单倍体细胞交配，融合成双倍体毕赤酵母研究意义巴斯德毕赤酵母的一个生物学特点是，甲醇代谢所需。

Koichi Ogata等人于1969年首次发现了某些酵母可以利用甲醇为唯一碳源和能源生长Ogata， et a11969 ，此后，用甲醇利用型酵母生产单细胞蛋白作为动物饲料的潜力就引起了广泛关注1987年，Cregg等人首次报道了用甲醇营养型酵母表达乙型肝炎表面抗原HbsAg随后Philip Petroleum公司与Salk Institute Biotechnology。

甲醇诱导毕赤酵母表达原理1毕赤酵母能够高效表达外源基因，是因为其有更强的强启动子，即醇氧化酶启动子PAOX2甲醇营养型酵母能将甲醇分解为甲醛和过氧化氢，在此反应中参与的酶是醇氧化酶AOX1和AOX2。

因此，一般不用酿酒酵母做重组蛋白质表达的宿主菌 二，甲醇营养型酵母表达系统甲醇酵母表达系统是目前应用最广泛的酵母表达系统目前甲醇酵母主要有汉森酵母属Hansenula，毕赤酵母属Pichia，球拟酵母属Torulopsis等，并以毕赤酵母属Pichia应用最多甲醇酵母的表达载体为整合型质粒，载体中含有与。

而最近几年每年报道的在毕赤酵母中表达的外源基因就有几十种，且一年比一年多，与其它表达系统相比，毕赤酵母表达系统具有以下优势1含有特有的强有力的AOX醇氧化酶基因启动子，用甲醇可严格地调控外源基因的表达2表达水平高，即可在胞内表达，又可分泌型表达毕赤酵母中，报道的最高表达。

甲醇毕赤酵母电转化条件的研究 摘 要采用电转化的方法，将携带有组织型纤溶酶原激活剂突变体tPA355基因的 DNA 片段 转化进甲醇毕赤酵母Pichia methanolica通过调整参数，对影响电转化效率的主要因素进行探讨，建立了质粒 pMETαtPA355对甲醇毕赤酵母 PMAD16 的高效电转化方法， 得出转化。

毕赤酵母表达系统的优势在于其高效稳定且低成本，可以选择胞内或胞外分泌路径胞外分泌路径尤其适合工业生产，通过优化甲醇浓度，可进一步提高蛋白纯化效率此外，离子交换层析作为纯化手段，如DEAE层析，利用其电荷分离特性，不仅能有效去除杂蛋白，而且在大规模生产中展现出了良好的可扩展性和自动化特性。

含有抗生素巴斯德毕赤酵母，是甲醇营养型酵母中的一类能够利用甲醇作为唯一碳源和能源的酵母菌，毕赤酵母化学转化不进去的原因含有抗生素，化学转化采用热化学技术将生物质转换成其他能量形式。

八十年代巴斯德毕赤酵母曾被用于生产单细胞蛋白SCP，有很好的发酵基础，菌体密度可达100gL干重其生长培养液的组分包括无机盐微量元素生物素氮源和碳源，廉价而无毒它能在以甲醇为唯一碳源的培养基中快速生长，其中醇氧化酶AOX甲醇代谢途径的关键酶可达细胞可溶性蛋白的30%而在葡萄糖。

巴斯德毕赤酵母在上世纪曾因其出色的单细胞蛋白SCP生产性能而备受瞩目，其菌体密度最高可达100克每升干重，显示出极强的发酵潜力这种酵母的生长培养基由无机盐微量元素生物素氮源和碳源构成，这些成分既经济又无害特别的是，它能在以甲醇为唯一碳源的环境中快速繁殖，其中甲醇氧化酶AOX。

PH升高到多少有染菌的可能，尝试现用低PH28左右处理一下23H，然后调回PH50，再试一试你摇床速率是多少瓶口用什么封的，建议还是用纱布，用那种带孔的塑料膜我感觉不太靠谱，灭菌的时候沾上点水就不太透气了。

并经过翻译折叠和修饰等步骤蛋白质通常以分泌形式积累在细胞外或细胞内感受态诱导基因如AOX1基因是响应甲醇的诱导子，当添加甲醇时，会启动该基因的表达通过适当控制聚甲醇浓度和培养时间，可以实现目标蛋白在感受态下的高水平表达毕赤酵母gs115感受态制备的原理主要是通过构建表达载体转化。

13GFPSKL毕赤酵母发酵绿色素成分为13GFPSKL，被分选到过氧化物酶体中，巴斯德毕赤酵母，是甲醇营养型酵母中的一类能够利用甲醇作为唯一碳源和能源的酵母菌与其它酵母一样，在无性生长期主要以单倍体形式存在。

2表达效率高，其表达的外源蛋白可占总表达蛋白的90%以上，有利于目的蛋白的分离纯化3在简单合成培养基中可实现高密度培养4表达质粒能在基因组的特定位点以单拷贝或多拷贝的形式稳定整合5由于该酵母可以以甲醇为唯一碳源和能源，而绝大多数微生物并不能以甲醇为碳源，可以减少污染。

胞内表达载体主要有pHIL，MG1003，GS115 AOX1，KM71，SMD1168毕赤酵母宿主菌常用的有GS115和KM71两种，都具有HIS4营养缺陷标记其中，GS115菌株具有AOX1基因，是Mut+，即甲醇利用正常型而KM。